Coombs Test- direkter und indirekter Coombs Test

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Zuletzt aktualisiert am 4. Februar 2021 von Sagar Aryal

  • Der Coombs Test ist eine direkte Agglutinationsreaktion, besser bekannt als Antiglobulin-Test.
  • Es wurde 1945 von Coombs, Mourant und Race ursprünglich zum Nachweis unvollständiger Anti-Rh-Antikörper entdeckt.
  • Im Test agglutinieren unvollständige Antikörper keine Erythrozyten. Unvollständiges Antikörper-Antiglobulin bedeckt die Oberfläche von Erythrozyten, verursacht jedoch keine Agglutination.
  • Wenn solche Erythrozyten mit Antiglobulin oder Coombs-Serum behandelt werden, werden die Zellen agglutiniert.
  • Coombs-Serum oder Coombs-Reagenz ist ein spezielles Serum eines Kaninchens oder eines anderen Tieres, das zuvor mit gereinigtem humanem Globulin immunisiert wurde, um Antikörper herzustellen, die gegen IgG und Komplement gerichtet sind (z. kaninchen-Antiserum gegen humanes Globulin).
  • Es wird in den direkten und indirekten Coomb-Tests verwendet und auch als Antihumanglobulin bezeichnet.

Ziele des Coomb-Tests

Zum Nachweis von roten Blutkörperchen, die mit IgG-Alloantikörpern, IgG-Autoantikörpern oder Komplementkomponenten sensibilisiert sind.

Prinzip des Coomb-Tests

Unter bestimmten Bedingungen binden Komplementproteine oder häufiger unvollständige Antikörper (IgG) durch den Fab-Teil des Immunglobulins an die Erythrozytenmembran. Diese Zellen sollen sensibilisiert sein. Die Sensibilisierung der roten Blutkörperchen kann in vivo oder vitro erfolgen. Die an die roten Blutkörperchen gebundenen IgG-Moleküle sind nicht in der Lage, die Lücke zwischen sensibilisierten roten Blutkörperchen zu überbrücken, die durch die negative Ladung auf ihrer Oberfläche voneinander getrennt sind und wodurch die sensibilisierten roten Blutkörperchen nicht agglutinieren.

Die Zugabe des Coomb’schen Reagenzes (Antiglobulinserum) vervollständigt jedoch die Reaktion. Wenn das Serum den sensibilisierten Zellen zugesetzt wird, reagiert der Fab-Teil des Anti-Human-Globulinmoleküls (Anti-IgG) mit den Fc-Teilen zweier benachbarter IgG-Moleküle, die an Erythrozyten gebunden sind, wodurch die Lücke zwischen sensibilisierten Erythrozyten überbrückt und eine Agglutination verursacht wird.

Wenn also der humane IgG-Antikörper bereits in vivo (im Blutkreislauf) an die roten Blutkörperchen des Patienten gebunden ist oder das Patientenserum unvollständige Antikörper enthält, die in vitro an Erythrozyten binden können, führt die Zugabe von Anti-Human-IgG dazu, dass die Zellen agglutinieren. Dies ist ein positiver Coomb-Test.

Arten des Coomb-Tests

Es gibt zwei Arten von Coombs-Tests: den direkten Coomb-Test und den indirekten Coomb-Test.

Direkter Coomb-Test (direkter Antiglobulintest)

  • Der direkte Test ist häufiger und prüft auf Antikörper, die an die Oberfläche der roten Blutkörperchen gebunden sind.
  • In diesem Test erfolgt die Sensibilisierung roter Blutkörperchen (RBCs) mit unvollständigen Antikörpern in vivo.
  • Die zellgebundenen Antikörper können mit diesem Test nachgewiesen werden, bei dem Antiserum gegen menschliches Immunglobulin verwendet wird, um die roten Blutkörperchen des Patienten zu agglutinieren.

Indirekter Coomb-Test (indirekter Antiglobulintest)

  • Der indirekte Test prüft auf nicht gebundene Antikörper, die im Blutkreislauf schwimmen.
  • In diesem Test erfolgt die Sensibilisierung von Erythrozyten mit unvollständigen Antikörpern in vitro.
  • Das Serum des Patienten wird mit normalen roten Blutkörperchen gemischt und Antiserum zu humanem Immunglobulin hinzugefügt. Agglutination tritt auf, wenn Antikörper im Serum des Patienten vorhanden sind.

Anforderungen an den Coomb-Test

Reagenzgläser, Zentrifuge, Anti-Human-Globulin (AHG) -Reagenz, vorsensibilisierte rote Blutkörperchen (Coombs-Kontrollzellen), Kochsalzlösung.

Verfahren des Coomb-Tests

Die Verwendung von Antihumanglobulinserum zum Nachweis der Sensibilisierung roter Blutkörperchen in vitro ist eine zweistufige Technik des indirekten Antiglobulintests (IAT). Auf der anderen Seite wird die Sensibilisierung von roten Blutkörperchen in vivo durch eine Stufentechnik nachgewiesen – den direkten Antiglobulintest (DAT).

Direkter Coomb-Test

  1. Rote Blutkörperchen, die im Verdacht stehen, sensibilisiert zu sein, werden 3 bis 4 mal in einem großen Volumen Kochsalzlösung gewaschen.
  2. Zu den sedimentierten Zellen werden zwei Tropfen Anti-Human-Globulinserum gegeben.
  3. Es wird gut gemischt und eine Minute bei 1500 U / min zentrifugiert.
  4. Die Agglutination wird untersucht, indem man sie gegen einen beleuchteten Hintergrund hält und auf den Boden des Röhrchens klopft.
  5. Wenn die Agglutination nicht sichtbar ist, wird das Röhrchen 10 min bei Raumtemperatur belassen. dann erneut zentrifugiert und gelesen. Ein schwächer reagierender Antikörper kann eine verzögerte Reaktion zeigen und dies wird als positiv angesehen.
  6. Wenn in Schritt 5 keine Hämagglutination beobachtet wird, wird ein Tropfen vorsensibilisierter roter Blutkörperchen (5% ige Suspension ist Kochsalzlösung) zugegeben. Dies sollte zu einer Hämagglutination vorsensibilisierter Zellen führen, was darauf hinweist, dass das Antihumanglobulin (AHG) reaktiv ist und das Ergebnis gültig ist.

Indirekter Coomb-Test

  1. 4% es wird eine Salzsuspension der Testzellen hergestellt.
  2. Zwei Tropfen Zellsuspension werden in ein kleines Reagenzglas gegeben.
  3. Der Zellsuspension werden zwei Tropfen Antiserum zugesetzt.
  4. Es wird in einem Wasserbad bei 37°C für 30 min inkubiert.
  5. Das Röhrchen aus dem Wasserbad wird entfernt und 3 bis 4 mal mit einem großen Volumen Kochsalzlösung gewaschen. Es wird nach dem letzten Waschen vollständig dekantiert.
  6. Zwei Tropfen Anti human Globulin (AHG) werden sofort zugegeben und gut vermischt.
  7. Es wird eine Minute bei 1500 U/min zentrifugiert und auf Hämagglutination untersucht.
  8. Bei negativer Hämagglutination werden vorsensibilisierte Reagenzzellen zugegeben, um die Reaktivität von AHG zu testen. Agglutination muss mit der Zugabe von Coombs ‘Kontrollzellen gesehen werden.

Ergebnisinterpretation des Coomb-Tests

Ergebnisinterpretation des Coomb-Tests

Positiv: Eine Verklumpung der roten Blutkörperchen (Agglutination) während des Tests.

Die Agglutination von Blutzellen während eines direkten Coomb-Tests legt nahe, dass Antikörper auf roten Blutkörperchen des Patienten vorhanden sein können und dass der Zustand der Hämolyse anhalten kann.

Die Agglutination von Blutzellen während eines indirekten Coomb-Tests deutet auf das Vorhandensein von Antikörpern hin, die im Blutkreislauf zirkulieren und das Immunsystem dazu veranlassen können, auf rote Blutkörperchen zu reagieren, die als körperfremd gelten — insbesondere auf solche, die während einer Bluttransfusion vorhanden sein können.

Negativ: Keine Verklumpung oder Agglutination der roten Blutkörperchen.

Anwendungen des Coomb-Tests

  1. Der Coomb-Test ist einer der Bluttests, mit denen die Art der Anämie eines anämischen Patienten ermittelt werden kann.
  2. Es wird ein indirekter Test durchgeführt, um festzustellen, ob eine mögliche schlechte Reaktion auf eine Bluttransfusion vorliegt.
  3. Blutbanken verwenden den indirekten Coombs-Test, um festzustellen, ob wahrscheinlich eine Nebenwirkung auf zu transfundierendes Blut vorliegt.
  4. Coombs-Tests werden zum Nachweis von Anti-Rh-Antikörpern verwendet.
  5. Es wird auch verwendet, um unvollständige Antikörper bei Brucellose und anderen Krankheiten nachzuweisen.
  6. Der indirekte Coombs-Test wird bei pränatalen Tests schwangerer Frauen eingesetzt.
  7. Der Test wird an der Blutprobe des Neugeborenen durchgeführt, normalerweise bei einem Neugeborenen mit Gelbsucht.
  8. Es hilft bei der Erkennung von Erkrankungen wie hämolytischer Anämie, chronischer lymphatischer Leukämie, Erythroblastose fetalis, infektiöser Mononukleose, Mykoplasmeninfektion, Syphilis, systemischem Lupus erythematodes usw.

Einschränkungen des Coomb-Tests

  • Manchmal, insbesondere bei älteren Erwachsenen, führt ein Coomb-Test auch ohne andere Krankheiten oder Risikofaktoren zu einem abnormalen Ergebnis.
  • Der Test kann nur selten zur Diagnose eines medizinischen Zustands verwendet werden.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Rennen, R. R. (1945). “Ein neuer Test zum Nachweis von schwachen und unvollständigen Rh-Agglutininen”. In: British journal of experimental pathology. 26: 255–66.
  3. Lydyard, PM, Whelan,A.,& Fanger,MW (2005).Immunologie (2 ed.).London: BIOS Scientific Publishers.
  4. Parija S.C. (2012). Lehrbuch der Mikrobiologie & Immunologie.(2 Aufl.). Indien: Elsevier India.
  5. Sastry A.S. & Bhat S.K. (2016). Grundlagen der medizinischen Mikrobiologie. Neu-Delhi : Jaypee Brothers Medical Publishers.

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