Coombin Test – Direct and Indirect Coombin Test

biologian opetusvideot

viimeksi päivitetty 4.helmikuuta 2021 Sagar Aryal

  • Coombin testi on suora agglutinaatioreaktio, yleisemmin antiglobuliinikoe.
  • sen löysivät Coombs, Mourant ja Race vuonna 1945 alun perin epätäydellisten Rh-vasta-aineiden havaitsemiseksi.
  • kokeessa epätäydelliset vasta-aineet eivät agglutinoi punasoluja. Epätäydellinen vasta-aine antiglobuliini peittää punasolujen pinnan, mutta ei aiheuta agglutinaatiota.
  • kun tällaisia punasoluja hoidetaan antiglobuliinilla tai Coombsin seerumilla, solut agglutinoituvat.
  • Coombsin seerumi tai Coombin reagenssi on kanin tai muun eläimen erityinen seerumi, joka on aiemmin immunisoitu puhdistetulla ihmisen globuliinilla valmistamaan vasta-aineita IgG: tä ja komplementtia vastaan (esim. kanin antiseerumi ihmisen globuliinia vastaan).
  • sitä käytetään suorissa ja epäsuorissa Coombin testeissä ja sitä kutsutaan myös anti-ihmisglobuliiniksi.

Coombin testin tavoitteet

IgG: llä allovasta-aineilla, IgG: llä autovasta-aineilla tai komplementtikomponenteilla herkistettyjen punasolujen havaitseminen.

Coombin testin periaate

tietyissä olosuhteissa komplementtiproteiinit tai yleisemmin epätäydelliset vasta-aineet (IgG) kiinnittyvät punasolukalvoon immunoglobuliinin Fab-osan kautta. Näiden solujen sanotaan olevan herkistyneitä. Punasolujen herkistyminen voi tapahtua in vivo tai vitro. Punasoluihin kiinnittyneet IgG-molekyylit eivät pysty kuromaan umpeen kuilua herkistyneiden punasolujen välillä, jotka niiden pinnalla oleva negatiivinen varaus erottaa toisistaan ja joiden seurauksena herkistyneet punasolut eivät agglutinoidu.

Coombin reagenssin (antiglobuliiniseerumi) lisääminen kuitenkin täydentää reaktion. Kun seerumia lisätään herkistyneisiin soluihin, anti-human globuliinimolekyylin (anti-IgG) Fab-osa reagoi kahden vierekkäisen IgG-molekyylin Fc-osien kanssa, jotka ovat kiinnittyneet punasoluihin, jolloin herkistyneiden punasolujen välinen kuilu umpeutuu ja agglutinaatio syntyy.

jos ihmisen IgG-vasta-aine on jo kiinnittynyt potilaan punasoluihin in vivo (verenkierrossa) tai potilaan seerumi sisältää epätäydellisiä vasta-aineita, jotka voivat kiinnittyä punasoluihin in vitro, anti-human IgG: n lisääminen saa solut agglutinoitumaan. Tämä on positiivinen Coombin testi.

Coombin testin tyypit

Coombsin testejä on kahdenlaisia: suora Coombin testi ja epäsuora Coombin testi.

suora Coombin testi (suora Antiglobuliinitesti)

  • suora testi on yleisempi ja tarkistaa vasta-aineita, jotka ovat kiinnittyneet punasolujen pintaan.
  • tässä testissä punasolujen herkistyminen epätäydellisillä vasta-aineilla tapahtuu In vivo.
  • soluun sitoutuneet vasta-aineet voidaan todeta tällä testillä, jossa ihmisen immunoglobuliinia vastaan käytettävää antiseerumia käytetään potilaan punasolujen agglutinointiin.

epäsuora Coombin testi (epäsuora Antiglobuliinitesti)

  • epäsuorassa testissä tarkistetaan verenkierrossa kelluvat irralliset vasta-aineet.
  • tässä testissä punasolujen herkistyminen epätäydellisillä vasta-aineilla tapahtuu in vitro.
  • potilaan seerumi sekoitetaan normaaleihin punasoluihin ja lisätään antiseerumia ihmisen immunoglobuliiniin. Agglutinaatio tapahtuu, jos potilaan seerumissa on vasta-aineita.

Coombin testin vaatimukset

koeputket, sentrifugit, antiglobuliini (AHG)-reagenssi, esiheristetyt punasolut (Coombsin kontrollisolut), suolaliuos.

Coombin testin menettely

antihumaaniglobuliiniseerumin käyttö punasolujen herkistymisen osoittamiseen in vitro on kaksivaiheinen menetelmä, joka muodostaa epäsuoran antiglobuliinitestin (IAT). Toisaalta punasolujen herkistyminen in vivo havaitaan yhden vaiheen tekniikalla-suoralla antiglobuliinitestillä (dat).

suora Coombin testi

  1. herkistyneiksi epäiltyjä punasoluja pestään 3-4 kertaa suuressa määrässä suolaliuosta.
  2. sedimentoituneisiin soluihin lisätään kaksi tippaa Anti-human globuliiniseerumia.
  3. se sekoitetaan hyvin ja sentrifugoidaan nopeudella 1500 rpm yhden minuutin ajan.
  4. agglutinaatio tutkitaan pitämällä kiinni valaistusta taustaa vasten ja naputtamalla putken pohjaa.
  5. jos agglutinaatiota ei havaita, putken annetaan olla huoneenlämmössä 10 minuuttia. sitten uudelleen sentrifugoidaan ja luetaan. Heikompi reagoiva vasta-aine voi osoittaa viivästynyttä reaktiota ja tätä pidetään positiivisena.
  6. jos hemagglutinaatiota ei havaita vaiheessa 5, lisätään yksi pisara presensitoituja punasoluja (5-prosenttinen suspensio on keittosuolaliuosta). Tämän pitäisi johtaa esiherkistyneiden solujen hemagglutinaatioon, mikä osoittaa, että antihumaaniglobuliini (AHG) on reaktiivinen ja tulos on pätevä.

epäsuora Coombin testi

  1. 4% testisoluista valmistetaan suolaliuossuspensio.
  2. pieneen koeputkeen lisätään kaksi tippaa solususpensiota.
  3. solususpensioon lisätään kaksi tippaa antiseerumia.
  4. sitä inkuboidaan vesihauteessa 37°C: ssa 30 minuutin ajan.
  5. vesihauteesta otettu putki poistetaan ja pestään 3-4 kertaa suurella määrällä suolaliuosta. Se on täysin dekantoitu viimeisen pesun jälkeen.
  6. lisätään välittömästi kaksi tippaa antiglobuliinia (AHG) ja sekoitetaan hyvin.
  7. sitä sentrifugoidaan nopeudella 1500 rpm yhden minuutin ajan ja tutkitaan hemagglutinaation varalta.
  8. negatiivisen hemagglutinaation yhteydessä lisätään valmiiksi herkistyneitä reagenssisoluja AHG: n reaktiivisuuden testaamiseksi. Agglutinaatio on nähtävä lisäämällä Coombsin kontrollisoluja.

Coombin testin tuloksen tulkinta

Coombin testin tuloksen tulkinta

positiivinen: punasolujen paakkuuntuminen (agglutinaatio) testin aikana.

verisolujen agglutinaatio suoran Coombin testin aikana viittaa siihen, että potilaan punasoluissa voi olla vasta-aineita ja että hemolyysi voi jatkua.

verisolujen agglutinaatio epäsuoran Coombin testin aikana viittaa siihen, että verenkierrossa on vasta — aineita, jotka voivat saada immuunijärjestelmän reagoimaan punasoluihin, joita pidetään elimistölle vieraina-erityisesti niihin, joita voi olla verensiirron aikana.

negatiivinen: ei punasolujen paakkuuntumista tai sakkautumista.

Coombin testin Sovellukset

  1. Coombin testi on yksi verikokeista, joilla pyritään selvittämään, millaisesta anemiasta anemiapotilas kärsii.
  2. epäsuoralla testillä selvitetään, oliko verensiirto mahdollisesti aiheuttanut huonon reaktion.
  3. veripankit käyttävät epäsuoraa Coombsin testiä selvittääkseen, onko verensiirtoon todennäköisesti kohdistuva haittavaikutus.
  4. Coombsin testejä käytetään anti-Rh-vasta-aineiden osoittamiseen.
  5. sitä käytetään myös epätäydellisten vasta-aineiden osoittamiseen luomistaudissa ja muissa sairauksissa.
  6. epäsuoraa Coombsin testiä käytetään raskaudenkeskeytystesteissä.
  7. testi tehdään vastasyntyneen verinäytteestä, yleensä keltatautia sairastavan vastasyntyneen yhteydessä.
  8. se auttaa sellaisten sairauksien kuin hemolyyttinen anemia, krooninen lymfosyyttinen leukemia, erytroblastoosi fetalis, tarttuva mononukleoosi, mykoplasmainfektio, kuppa, systeeminen lupus erythematosus jne.toteamisessa.

Coombin testin rajoitukset

  • joskus, erityisesti vanhemmilla aikuisilla, Coombin testin tulos on epänormaali, vaikka muita sairauksia tai riskitekijöitä ei olisikaan.
  • testiä voidaan käyttää vain harvoin sairauden diagnosointiin.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Race, R. R. (1945). “A new test for the detection of weak and incomplete Rh agglutinins”. British journal of experimental pathology. 26: 255–66.
  3. Lydyard, P. M., Whelan, A.,& Fanger, M. W. (2005).Immunologia (2.).Lontoo: BIOS Scientific Publishers.
  4. Parija S. C. (2012). Mikrobiologian oppikirja & immunologia.(2.). Intia: Elsevier Intia.
  5. Sastry A. S. & Bhat S. K. (2016). Lääketieteellisen mikrobiologian perusteet. New Delhi: Jaypee Brothers Medical Publishers.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.