Test de Coomb – Test de Coomb Direct et Indirect

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Dernière Mise à jour le 4 février 2021 par Sagar Aryal

  • Le test de Coomb est une réaction d’agglutination directe, plus communément appelée test d’antiglobuline.
  • Il a été découvert par Coombs, Mourant et Race en 1945 à l’origine pour la détection d’anticorps anti-Rh incomplets.
  • Dans le test, les anticorps incomplets n’agglutinent pas les érythrocytes. L’antiglobuline d’anticorps incomplet recouvre la surface des érythrocytes mais ne provoque aucune agglutination.
  • Lorsque de tels érythrocytes sont traités avec de l’antiglobuline ou du sérum de Coombs, les cellules sont agglutinées.
  • Le sérum de Coombs ou le réactif de Coomb est un sérum spécial d’un lapin ou d’un autre animal préalablement immunisé avec de la globuline humaine purifiée pour préparer des anticorps dirigés contre les IgG et le complément (par exemple. antisérum de lapin contre la globuline humaine).
  • Il est utilisé dans les tests de Coomb directs et indirects et également appelé globuline antihumaine.

Objectifs du test de Coomb

Pour détecter les globules rouges sensibilisés avec des alloanticorps IgG, des autoanticorps IgG ou des composants du complément.

Principe du test de Coomb

Dans certaines conditions, les protéines du complément ou plus couramment, les anticorps incomplets (IgG) se fixent à la membrane des globules rouges par la partie Fab de l’immunoglobuline. Ces cellules sont dites sensibilisées. La sensibilisation des globules rouges peut se produire in vivo ou vitro. Les molécules d’IgG attachées aux globules rouges sont incapables de combler l’écart entre les globules rouges sensibilisés qui sont séparés les uns des autres par la charge négative à leur surface et à la suite de quoi les globules rouges sensibilisés ne s’agglutinent pas.

L’ajout du réactif de Coomb (sérum d’antiglobuline) complète cependant la réaction. Lorsque le sérum est ajouté aux cellules sensibilisées, la partie Fab de la molécule d’anti-globuline humaine (anti-IgG) réagit avec les parties Fc de deux molécules d’IgG adjacentes attachées aux globules rouges, comblant ainsi l’écart entre les globules rouges sensibilisés et provoquant une agglutination.

Ainsi, si un anticorps IgG humain s’est déjà attaché aux globules rouges du patient in vivo (dans la circulation sanguine), ou si le sérum du patient contient des anticorps incomplets qui peuvent se fixer aux globules rouges in vitro, l’ajout d’IgG anti-humaines provoquera l’agglutination des cellules. C’est un test de Coomb positif.

Types de test de Coomb

Il existe deux types de tests de Coombs: le test de Coomb direct et le test de Coomb indirect.

Test de Coomb Direct (Test d’Antiglobuline Direct)

  • Le test direct est plus courant et vérifie la présence d’anticorps attachés à la surface des globules rouges.
  • Dans ce test, la sensibilisation des globules rouges (CBR) avec des anticorps incomplets a lieu in vivo.
  • Les anticorps liés aux cellules peuvent être détectés par ce test dans lequel un antisérum contre l’immunoglobuline humaine est utilisé pour agglutiner les globules rouges du patient.

Test de Coomb Indirect (Test d’Antiglobuline Indirect)

  • Le test indirect vérifie la présence d’anticorps non attachés qui flottent dans la circulation sanguine.
  • Dans ce test, la sensibilisation des globules rouges avec des anticorps incomplets a lieu in vitro.
  • Le sérum du patient est mélangé à des globules rouges normaux et un antisérum à l’immunoglobuline humaine est ajouté. L’agglutination se produit si des anticorps sont présents dans le sérum du patient.

Exigences pour l’essai de Coomb

Tubes à essai, centrifugeuse, réactif Anti-globuline humaine (AHG), globules rouges pré-sensibilisés (cellules témoins de Coombs), Solution saline.

Procédure du test de Coomb

L’utilisation de sérum de globuline antihumaine pour détecter la sensibilisation des globules rouges in vitro est une technique en deux étapes constituant un test indirect d’antiglobuline (TAI). D’autre part, la sensibilisation des globules rouges in vivo est détectée par une technique d’étape – le test d’antiglobuline directe (DAT).

Test de Coomb direct

  1. Les globules rouges suspectés d’être sensibilisés sont lavés 3 à 4 fois dans un grand volume de solution saline.
  2. Deux gouttes de sérum anti-globuline humaine sont ajoutées aux cellules sédimentées.
  3. Il est bien mélangé et centrifugé à 1500 tr/min pendant une minute.
  4. L’agglutination est examinée en se tenant contre un fond éclairé et en tapotant le fond du tube.
  5. Si l’agglutination n’est pas visible, le tube est laissé à température ambiante pendant 10 min. puis re-centrifugé et lu. Un anticorps à réaction plus faible peut montrer une réaction retardée et ceci est considéré comme positif.
  6. Si l’hémagglutination n’est pas observée à l’étape 5, une goutte de globules rouges présensibilisés (la suspension à 5% est saline) est ajoutée. Cela devrait entraîner une hémagglutination des cellules pré-sensibilisées indiquant que la globuline antihumaine (AHG) est réactive et que le résultat est valide.

Test de Coomb indirect

  1. 4% une suspension saline des cellules test est préparée.
  2. Deux gouttes de suspension cellulaire sont ajoutées à un petit tube à essai.
  3. Deux gouttes d’antisérum sont ajoutées à la suspension cellulaire.
  4. Il est incubé au bain-marie à 37°C pendant 30 min.
  5. Le tube du bain-marie est retiré et lavé 3 à 4 fois avec un grand volume de solution saline. Il est complètement décanté après le dernier lavage.
  6. Deux gouttes d’anti globuline humaine (AHG) sont immédiatement ajoutées et bien mélangées.
  7. Il est centrifugé à 1500 tr/min pendant une minute et examiné pour l’hémagglutination.
  8. En cas d’hémagglutination négative, des cellules réactives pré-sensibilisées sont ajoutées pour tester la réactivité de l’AHG. L’agglutination doit être observée avec l’ajout des cellules de contrôle de Coombs.

Interprétation du résultat du Test de Coomb

 Interprétation du Résultat du Test de Coomb

Positif: Une agglutination des globules rouges (agglutination) pendant le test.

L’agglutination des cellules sanguines lors d’un test de Coomb direct suggère que des anticorps peuvent être présents sur les globules rouges du patient et que l’état d’hémolyse peut persister.

L’agglutination des cellules sanguines lors d’un test de Coomb indirect suggère la présence d’anticorps circulant dans la circulation sanguine qui pourraient faire réagir le système immunitaire à tous les globules rouges considérés comme étrangers à l’organisme, en particulier ceux qui peuvent être présents lors d’une transfusion sanguine.

Négatif : Pas d’agglutination ou d’agglutination des globules rouges.

Applications du test de Coomb

  1. Le test de Coomb est l’un des tests sanguins utilisés pour déterminer le type d’anémie dont souffre un patient anémique.
  2. Un test indirect est administré pour déterminer s’il y a eu une mauvaise réaction potentielle à une transfusion sanguine.
  3. Les banques de sang utilisent le test de Coombs indirect pour déterminer s’il est probable qu’il y ait une réaction indésirable au sang à transfuser.
  4. Les tests de Coombs sont utilisés pour la détection des anticorps anti-Rh.
  5. Il est également utilisé pour détecter les anticorps incomplets dans la brucellose et d’autres maladies.
  6. Le test de Coombs indirect est utilisé dans les tests prénataux des femmes enceintes.
  7. Le test est effectué sur l’échantillon de sang du nouveau-né, généralement dans le cadre d’un nouveau-né atteint d’ictère.
  8. Il aide à la détection d’affections telles que l’anémie hémolytique, la leucémie lymphocytaire chronique, l’érythroblastose fœtale, la mononucléose infectieuse, l’infection mycoplasmique, la syphilis, le lupus érythémateux disséminé, etc.

Limites du test de Coomb

  • Parfois, en particulier chez les personnes âgées, un test de Coomb aura un résultat anormal même sans autre maladie ou facteur de risque.
  • Le test ne peut être utilisé que rarement pour diagnostiquer une condition médicale.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Race, R. R. (1945). “Un nouveau test pour la détection des agglutinines Rh faibles et incomplètes”. Journal britannique de pathologie expérimentale. 26: 255–66.
  3. Lydyard, P.M., Whelan, A., & Fanger, M.W. (2005).Immunologie (2 éd.).Londres: Éditeurs scientifiques BIOS.
  4. Parija S.C. (2012). Manuel de microbiologie & Immunologie.(2 éd.). Inde: Elsevier Inde.
  5. Sastry A.S. & Bhat S.K. (2016). Les bases de la microbiologie médicale. New Delhi: Éditeurs médicaux des Frères Jaypee.

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