Coomb tesztje-közvetlen és közvetett Coomb teszt

Biológia oktatási videók

Utoljára 4.február 2021-én frissítette Sagar Aryal

  • a Coomb tesztje közvetlen agglutinációs reakció, közismertebb nevén antiglobulin teszt.
  • Coombs, Mourant és Race fedezte fel 1945-ben, eredetileg hiányos anti-Rh antitestek kimutatására.
  • a vizsgálat során a hiányos antitestek nem agglutinálják az eritrocitákat. A hiányos antitest antiglobulin bevonja az eritrociták felületét, de nem okoz agglutinációt.
  • ha az ilyen eritrocitákat antiglobulinnal vagy Coombs szérummal kezelik, akkor a sejtek agglutinálódnak.
  • a Coombs-szérum vagy Coomb-reagens egy nyúlból vagy más állatból származó speciális szérum, amelyet korábban tisztított humán globulinnal immunizáltak IgG és komplement elleni antitestek előállítására (pl. nyúl antiszérum az emberi globulin ellen).
  • a közvetlen és közvetett Coomb-tesztekben használják, és antihuman globulinnak is nevezik.

a Coomb-teszt célkitűzései

IgG alloantitestekkel, IgG autoantitestekkel vagy KOMPLEMENT komponensekkel szenzibilizált vörösvértestek kimutatására.

a Coomb-teszt elve

bizonyos körülmények között, komplementfehérjék vagy gyakrabban, hiányos antitestek (IgG) az immunglobulin Fab része révén kötődnek a vörösvértestek membránjához. Állítólag ezek a sejtek szenzibilizáltak. A vörösvértestek szenzibilizációja előfordulhat in vivo vagy vitro. A vörösvértestekhez kapcsolódó IgG molekulák nem képesek áthidalni a szenzibilizált vörösvértestek közötti rést, amelyeket a felületükön lévő negatív töltés választ el egymástól, aminek következtében a szenzibilizált vörösvértestek nem agglutinálódnak.

a Coomb reagensének (antiglobulin szérum) hozzáadása azonban befejezi a reakciót. Amikor a szérumot hozzáadjuk a szenzibilizált sejtekhez, az anti-humán globulin molekula (anti-IgG) Fab része reagál a vörösvértestekhez kapcsolódó két szomszédos IgG molekula Fc részeivel, ezáltal áthidalja a szenzibilizált vörösvértestek közötti rést és agglutinációt okoz.

tehát, ha a humán IgG antitest már in vivo (a véráramban) kapcsolódik a beteg vörösvértestjeihez, vagy a beteg széruma hiányos antitesteket tartalmaz, amelyek in vitro kötődhetnek a vörösvértestekhez, akkor az anti-humán IgG hozzáadása a sejteket agglutinálja. Ez egy pozitív Coomb-teszt.

a Coomb-teszt típusai

kétféle Coombs-teszt létezik: a közvetlen Coomb-teszt és az indirekt Coomb-teszt.

közvetlen Coomb-teszt (közvetlen Antiglobulin-teszt)

  • a közvetlen teszt gyakoribb, és ellenőrzi az antitesteket, amelyek a vörösvértestek felületéhez kapcsolódnak.
  • ebben a vizsgálatban a vörösvérsejtek (vörösvértestek) hiányos antitestekkel történő szenzibilizációja in vivo történik.
  • a sejthez kötött antitestek kimutathatók ezzel a vizsgálattal, amelynek során humán immunglobulin elleni antiszérumot alkalmaznak a beteg vörösvértestjeinek agglutinálására.

közvetett Coomb-teszt (közvetett Antiglobulin-teszt)

  • a közvetett teszt ellenőrzi a véráramban lebegő független antitesteket.
  • ebben a vizsgálatban a hiányos antitestekkel rendelkező vörösvértestek szenzibilizációja in vitro történik.
  • a beteg szérumát normál vörösvértestekkel elegyítik, és humán immunglobulinhoz antiszérumot adnak. Agglutináció akkor fordul elő, ha antitestek vannak jelen a beteg szérumában.

a Coomb-teszt követelményei

kémcsövek, centrifuga, anti-humán globulin (AHG) reagens, előre szenzibilizált vörösvértestek (Coombs-kontrollsejtek), sóoldat.

a Coomb-teszt eljárása

az antihuman globulin szérum alkalmazása a vörösvértestek szenzibilizációjának kimutatására in vitro kétlépcsős technika közvetett antiglobulin teszt (IAT). Másrészt a vörösvértestek in vivo szenzibilizációját egy szakaszos technikával – a közvetlen antiglobulin teszttel (dat) – detektáljuk.

közvetlen Coomb-teszt

  1. a szenzibilizációra gyanús vörösvértesteket 3-4 alkalommal mossuk nagy mennyiségű sóoldatban.
  2. két csepp anti-humán globulin szérumot adunk az üledékes sejtekhez.
  3. jól összekeverjük és 1500 fordulat / perc sebességgel egy percig centrifugáljuk.
  4. az agglutinációt megvilágított háttér előtt tartva és a cső aljának megérintésével kell megvizsgálni.
  5. ha az agglutináció nem látható,a csövet szobahőmérsékleten hagyjuk 10 percig. ezután újra centrifugáljuk és olvassuk. A gyengébb reagáló antitest késleltetett reakciót mutathat, és ez pozitívnak tekinthető.
  6. ha az 5.lépésben nem látható hemagglutináció, egy csepp előérzékeny vörösvértestet (5% szuszpenzió sóoldat) adunk hozzá. Ennek az előre szenzibilizált sejtek hemagglutinációját kell eredményeznie, jelezve, hogy az antihuman globulin (AHG) reaktív, és az eredmény érvényes.

közvetett Coomb-teszt

  1. 4% a vizsgálati sejtek sóoldatos szuszpenzióját készítjük.
  2. két csepp sejtszuszpenziót adunk egy kis kémcsőbe.
  3. két csepp antiszérumot adunk a sejtszuszpenzióhoz.
  4. vízfürdőben inkubáljuk 37cc hőmérsékleten 30 percig.
  5. a csövet a vízfürdőből eltávolítjuk, és 3-4 alkalommal mossuk nagy mennyiségű sóoldattal. Az utolsó mosás után teljesen dekantálódik.
  6. két csepp anti-humán globulint (AHG) azonnal hozzáadunk és jól összekeverünk.
  7. 1500 fordulat / perc sebességgel centrifugáljuk egy percig, és megvizsgáljuk hemagglutináció szempontjából.
  8. negatív hemagglutináció esetén előszenzibilizált reagenssejteket adunk hozzá az AHG reaktivitásának vizsgálatához. Az agglutinációt Coombs kontrollsejtek hozzáadásával kell látni.

a Coomb-teszt Eredményértelmezése

a Coomb-teszt Eredményértelmezése

pozitív: a vörösvértestek összetapadása (agglutináció) a vizsgálat során.

a vérsejtek agglutinációja a közvetlen Coomb-teszt során arra utal, hogy antitestek jelen lehetnek a beteg vörösvérsejtjein, és a hemolízis állapota fennmaradhat.

a vérsejtek agglutinációja egy közvetett Coomb — teszt során arra utal, hogy a véráramban keringő antitestek jelenléte miatt az immunrendszer reagálhat a test számára idegennek tekintett vörösvértestekre-különösen azokra, amelyek jelen lehetnek a vérátömlesztés során.

negatív: nincs vörösvértestek csomósodása vagy agglutinációja.

a Coomb-teszt alkalmazásai

  1. a Coomb-teszt az egyik olyan vérvizsgálat, amelyet az anémiás beteg szenved.
  2. közvetett tesztet adnak annak megállapítására, hogy volt-e lehetséges rossz reakció a vérátömlesztésre.
  3. a vérbankok az indirekt Coombs-tesztet használják annak meghatározására, hogy valószínűleg van-e mellékhatás a transzfúziós vérre.
  4. Coombs-teszteket használnak az anti-Rh antitestek kimutatására.
  5. a brucellózis és más betegségek hiányos antitestjeinek kimutatására is használják.
  6. a közvetett Coombs-tesztet terhes nők prenatális tesztelésére használják.
  7. a vizsgálatot az újszülött vérmintáján végezzük, általában sárgasággal rendelkező újszülött környezetében.
  8. segít az olyan állapotok kimutatásában, mint a hemolitikus vérszegénység, a krónikus limfocita leukémia, az erythroblastosis fetalis, a fertőző mononukleózis, a mycoplasma fertőzés, a szifilisz, a szisztémás lupus erythematosus stb.

a Coomb-teszt korlátai

  • néha, különösen idősebb felnőtteknél, a Coomb-teszt abnormális eredményt mutat más betegség vagy kockázati tényező nélkül is.
  • a teszt csak ritkán használható orvosi állapot diagnosztizálására.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Verseny, R. R. (1945). “Új teszt a gyenge és hiányos Rh agglutininek kimutatására”. British journal of experimental pathology. 26: 255–66.
  3. Lydyard, P.M., Whelan,A.,& Fanger,M. W. (2005).Immunológia (2 Szerk.).London: BIOS Tudományos kiadók.
  4. Parija S. C. (2012). Mikrobiológiai tankönyv & immunológia.(2 Szerk.). India: Elsevier India.
  5. Sastry A. S. & Bhat S. K. (2016). Az orvosi mikrobiológia alapjai. Új Delhi: Jaypee Testvérek Orvosi Kiadók.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.