Test di Coomb – Diretto e indiretto Test di Coomb

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Ultimo aggiornamento febbraio 4, 2021 da Sagar Aryal

  • Test di Coomb è una reazione di agglutinazione diretta, più comunemente noto come test antiglobulina.
  • È stato scoperto da Coombs, Mourant e Race nel 1945 originariamente per la rilevazione di anticorpi anti-Rh incompleti.
  • Nel test, gli anticorpi incompleti non agglutinano gli eritrociti. L’antiglobulina anticorpale incompleta ricopre la superficie degli eritrociti ma non causa alcuna agglutinazione.
  • Quando tali eritrociti vengono trattati con antiglobulina o siero di Coombs, le cellule vengono agglutinate.
  • Siero di Coombs o reagente di Coomb è un siero speciale da un coniglio o altro animale precedentemente immunizzato con globulina umana purificata per preparare anticorpi diretti contro IgG e complemento(ad es. antisiero di coniglio contro la globulina umana).
  • Viene utilizzato nei test diretti e indiretti di Coomb e chiamato anche globulina antiumana.

Obiettivi del test di Coomb

Per rilevare i globuli rossi sensibilizzati con alloanticorpi IgG, autoanticorpi IgG o componenti del complemento.

Principio della prova di Coomb

In determinate condizioni, le proteine del complemento o più comunemente, anticorpi incompleti (IgG) si attaccano alla membrana dei globuli rossi dalla porzione Fab dell’immunoglobulina. Si dice che queste cellule siano sensibilizzate. La sensibilizzazione dei globuli rossi può avvenire in vivo o in vitro. Le molecole IgG attaccate ai globuli rossi non sono in grado di colmare il divario tra i globuli rossi sensibilizzati che sono separati l’uno dall’altro dalla carica negativa sulla loro superficie e di conseguenza i globuli rossi sensibilizzati non agglutinano.

L’aggiunta del reagente di Coomb (siero antiglobulinico), tuttavia, completa la reazione. Quando il siero viene aggiunto alle cellule sensibilizzate, la porzione Fab della molecola di globulina anti-umana (anti-IgG) reagisce con le porzioni Fc di due molecole IgG adiacenti attaccate ai globuli rossi, colmando così il divario tra i globuli rossi sensibilizzati e causando l’agglutinazione.

Pertanto, se l’anticorpo IgG umano è già attaccato ai globuli rossi del paziente in vivo (nel sangue), o il siero del paziente contiene anticorpi incompleti che possono attaccarsi ai globuli rossi in vitro, l’aggiunta di IgG anti-umano causerà l’agglutinazione delle cellule. Questo è un test di Coomb positivo.

Tipi di test di Coomb

Esistono due tipi di test di Coombs: il test diretto di Coomb e il test indiretto di Coomb.

Prova diretta di Coomb (prova diretta dell’antiglobulina)

  • Il test diretto è più comune e controlla gli anticorpi che sono attaccati alla superficie dei globuli rossi.
  • In questo test, la sensibilizzazione dei globuli rossi (RBC) con anticorpi incompleti avviene in vivo.
  • Gli anticorpi legati alle cellule possono essere rilevati da questo test in cui viene utilizzato antisiero contro l’immunoglobulina umana per agglutinare i globuli rossi del paziente.

Prova indiretta di Coomb (prova indiretta dell’antiglobulina)

  • Il test indiretto controlla la presenza di anticorpi non collegati che galleggiano nel flusso sanguigno.
  • In questo test, la sensibilizzazione dei globuli rossi con anticorpi incompleti avviene in vitro.
  • Il siero del paziente viene miscelato con globuli rossi normali e viene aggiunto l’antisiero all’immunoglobulina umana. L’agglutinazione si verifica se nel siero del paziente sono presenti anticorpi.

Requisiti per la prova di Coomb

Provette, centrifuga, reagente anti-globulina umana (AHG), globuli rossi pre-sensibilizzati (cellule di controllo di Coombs), soluzione salina.

Procedura della prova di Coomb

L’uso di siero globulinico antiumano per rilevare la sensibilizzazione dei globuli rossi in vitro è una tecnica a due stadi costituiscono test antiglobulina indiretta (IAT). D’altra parte, la sensibilizzazione dei globuli rossi in vivo viene rilevata con una tecnica a stadio – il test diretto antiglobulina (DAT).

Prova diretta di Coomb

  1. I globuli rossi sospettati di essere sensibilizzati vengono lavati da 3 a 4 volte in grande volume di soluzione salina.
  2. Due gocce di siero anti-globulina umana vengono aggiunte alle cellule sedimentate.
  3. Viene miscelato bene e centrifugato a 1500 giri / min per un minuto.
  4. L’agglutinazione viene esaminata tenendo premuto su uno sfondo illuminato e toccando il fondo del tubo.
  5. Se l’agglutinazione non viene vista, il tubo viene lasciato a temperatura ambiente per 10 min. quindi ri-centrifugato e letto. Un anticorpo che reagisce più debole può mostrare una reazione ritardata e questo è considerato positivo.
  6. Se al punto 5 non si osserva emoagglutinazione, viene aggiunta una goccia di globuli rossi presensibilizzati (la sospensione al 5% è salina). Ciò dovrebbe comportare l’emoagglutinazione di cellule pre-sensibilizzate che indicano che la globulina antiumana (AHG) è reattiva e il risultato è valido.

Prova indiretta di Coomb

  1. 4% viene preparata la sospensione salina delle cellule di prova.
  2. Due gocce di sospensione cellulare vengono aggiunte a una piccola provetta.
  3. Due gocce di antisiero vengono aggiunte alla sospensione cellulare.
  4. Viene incubato a bagnomaria a 37°C per 30 min.
  5. Il tubo dal bagno d’acqua viene rimosso e lavato da 3 a 4 volte con un grande volume di soluzione salina. Viene completamente decantato dopo l’ultimo lavaggio.
  6. Due gocce di anti globulina umana (AHG) vengono immediatamente aggiunte e mescolate bene.
  7. Viene centrifugato a 1500 giri / min per un minuto ed esaminato per l’emoagglutinazione.
  8. In caso di emoagglutinazione negativa, vengono aggiunte cellule reagenti pre-sensibilizzate per testare la reattività dell’AHG. L’agglutinazione deve essere vista con l’aggiunta delle cellule di controllo di Coombs.

Interpretazione del risultato del test di Coomb

Interpretazione del risultato del test di Coomb

Positivo: aggregazione dei globuli rossi (agglutinazione) durante il test.

L’agglutinazione delle cellule del sangue durante un test diretto di Coomb suggerisce che gli anticorpi possono essere presenti sui globuli rossi del paziente e che la condizione di emolisi può persistere.

L’agglutinazione delle cellule del sangue durante un test indiretto di Coomb suggerisce la presenza di anticorpi circolanti nel sangue che potrebbero causare la reazione del sistema immunitario a qualsiasi globuli rossi considerati estranei all’organismo, in particolare quelli che possono essere presenti durante una trasfusione di sangue.

Negativo: Nessuna aggregazione o agglutinazione dei globuli rossi.

Applicazioni del test di Coomb

  1. Il test di Coomb è uno degli esami del sangue impiegati per aiutare a scoprire il tipo di anemia di cui soffre un paziente anemico.
  2. Il test indiretto viene somministrato per determinare se c’è stata una potenziale reazione negativa a una trasfusione di sangue.
  3. Le banche del sangue utilizzano il test indiretto di Coombs per determinare se è probabile che ci sia una reazione avversa al sangue da trasfondere.
  4. I test di Coombs sono utilizzati per il rilevamento di anticorpi anti-Rh.
  5. È anche usato per rilevare anticorpi incompleti nella brucellosi e in altre malattie.
  6. Il test indiretto di Coombs viene utilizzato nei test prenatali delle donne in gravidanza.
  7. Il test viene eseguito sul campione di sangue del neonato, di solito nell’ambiente di un neonato con ittero.
  8. Aiuta nel rilevamento di condizioni come anemia emolitica, leucemia linfocitica cronica, eritroblastosi fetalis, mononucleosi infettiva, infezione micoplasmatica, sifilide, lupus eritematoso sistemico ecc.

Limitazioni del test di Coomb

  • A volte, specialmente negli adulti più anziani, il test di Coomb avrà un risultato anormale anche senza altre malattie o fattori di rischio.
  • Il test può essere usato solo raramente per diagnosticare una condizione medica.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Race, R. R. (1945). “Un nuovo test per la rilevazione di agglutinine Rh deboli e incomplete”. British journal of experimental pathology. 26: 255–66.
  3. Lydyard, P. M., Whelan, A., & Fanger,M. W. (2005).Immunologia (2 ed.).Londra: BIOS Editori scientifici.
  4. Parija S. C. (2012). Libro di testo di microbiologia & Immunologia.(2 ed.). India: Elsevier India.
  5. Sastry A. S. & Bhat S. K. (2016). Elementi essenziali di microbiologia medica. Nuova Delhi : Jaypee Brothers Editori medici.

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