Test Coomba-bezpośredni i pośredni Test Coomba

Biologia Filmy edukacyjne

Ostatnia aktualizacja luty 4, 2021 przez Sagar Aryal

  • test Coomba jest bezpośrednią reakcją aglutynacyjną, bardziej znaną jako test antyglobulinowy.
  • został odkryty przez Coombsa, Mouranta i Race ‘ a w 1945 roku, pierwotnie w celu wykrycia niekompletnych przeciwciał anty-Rh.
  • w teście niekompletne przeciwciała nie aglutynują erytrocytów. Niekompletne przeciwciało antyglobulina pokrywa powierzchnię erytrocytów, ale nie powoduje aglutynacji.
  • gdy takie erytrocyty są leczone antyglobuliną lub surowicą Coombsa, komórki są aglutynowane.
  • Serum Coombsa lub odczynnik Coomba to specjalna surowica od królika lub innego zwierzęcia uprzednio immunizowana oczyszczoną globuliną ludzką w celu wytworzenia przeciwciał skierowanych przeciwko IgG i dopełniaczowi (np. antysurowica królika przeciwko ludzkiej globulinie).
  • jest stosowany w bezpośrednich i pośrednich testach Coomba, a także nazywany globuliną przeciwludzką.

wykrywanie czerwonych krwinek uczulonych na alloantywy IgG, autoprzeciwciała IgG lub składniki dopełniacza.

zasada testu Coomba

w pewnych warunkach białka dopełniacza lub częściej niekompletne przeciwciała (IgG) przyłączają się do błony komórkowej czerwonej przez część Fab immunoglobuliny. Te komórki są uwrażliwione. Uczulenie krwinek czerwonych może wystąpić in vivo lub vitro. Cząsteczki IgG przyłączone do czerwonych komórek nie są w stanie wypełnić luki między uwrażliwionymi czerwonymi komórkami, które są oddzielone od siebie ujemnym ładunkiem na ich powierzchni, w wyniku czego uwrażliwione czerwone komórki nie aglutynują się.

dodanie odczynnika Coomba (surowicy antyglobulinowej) kończy jednak reakcję. Gdy surowica jest dodawana do uwrażliwionych komórek, część Fab cząsteczki globuliny anty-ludzkiej (anty-IgG) reaguje z porcjami Fc dwóch sąsiednich cząsteczek IgG przyłączonych do czerwonych komórek, tym samym wypełniając lukę między uwrażliwionymi czerwonymi komórkami i powodując aglutynację.

Tak więc, jeśli ludzkie przeciwciało IgG zostało już przyłączone do czerwonych krwinek pacjenta in vivo (w krwiobiegu) lub surowica pacjenta zawiera niekompletne przeciwciała, które mogą przyłączać się do RBC in vitro, to dodanie anty-ludzkich IgG spowoduje aglutynację komórek. To pozytywny test Coomba.

rodzaje testów Coomba

istnieją dwa rodzaje testów Coombsa: bezpośredni test coomba i pośredni test Coomba.

bezpośredni Test Coomba (bezpośredni Test antyglobulinowy)

  • bezpośredni test jest bardziej powszechne i sprawdza przeciwciał, które są dołączone do powierzchni czerwonych krwinek.
  • w tym teście, uczulenie czerwonych krwinek (RBC) z niekompletnymi przeciwciałami ma miejsce in vivo.
  • w tym teście można wykryć przeciwciała związane z komórkami, w których do aglutynacji krwinek czerwonych stosuje się antyserum przeciwko ludzkiej immunoglobulinie.

Test pośredniego Coomba (pośredni Test antyglobulinowy)

  • test pośredni sprawdza niezwiązane przeciwciała, które unoszą się w krwiobiegu.
  • w tym teście, uczulenie RBC z niekompletnymi przeciwciałami ma miejsce in vitro.
  • serum pacjenta miesza się z normalnymi krwinkami czerwonymi i dodaje się surowicę do ludzkiej immunoglobuliny. Aglutynacja występuje, gdy przeciwciała są obecne w surowicy pacjenta.

wymagania dotyczące testu Coomba

probówki, Wirówka, odczynnik przeciwko ludzkiej globulinie (AHG), wstępnie uczulone krwinki czerwone (komórki kontrolne Coombsa), sól fizjologiczna.

procedura badania Coomba

zastosowanie surowicy antyglobulinowej do wykrywania uczulenia krwinek czerwonych in vitro jest techniką dwustopniową pośredniego testu antyglobulinowego (iat). Z drugiej strony, uczulenie krwinek czerwonych in vivo jest wykrywane za pomocą techniki jednego etapu-bezpośredniego testu antyglobulinowego (DAT).

bezpośredni Test Coomba

  1. czerwone krwinki podejrzewane o uczulenie przemywa się 3 do 4 razy w dużej objętości soli fizjologicznej.
  2. do sedymentowanych komórek dodaje się dwie krople surowicy przeciw ludzkiej globulinie.
  3. jest dobrze mieszany i wirowany przy 1500 obr. / min przez jedną minutę.
  4. aglutynację bada się, trzymając się oświetlonego tła i dotykając dna rury.
  5. jeśli nie widać aglutynacji, rurkę pozostawia się w temperaturze pokojowej przez 10 minut. następnie ponownie odwirowaliśmy i odczytaliśmy. Słabsze reagujące przeciwciało może wykazywać opóźnioną reakcję i jest to uważane za pozytywne.
  6. jeśli w punkcie 5 nie obserwuje się hemaglutynacji, dodaje się jedną kroplę wcześniej uwrażliwionych krwinek czerwonych (5% zawiesiny to sól fizjologiczna). Powinno to prowadzić do hemaglutynacji wstępnie uwrażliwionych komórek, wskazując, że globulina przeciwludzka (AHG) jest reaktywna i wynik jest prawidłowy.

Test pośredniego Coomba

  1. 4% przygotowuje się zawiesinę soli fizjologicznej komórek testowych.
  2. do małej probówki dodaje się dwie krople zawiesiny komórkowej.
  3. do zawiesiny komórek dodaje się dwie krople antysurowicy.
  4. inkubuje się go w łaźni wodnej w temperaturze 37°C przez 30 minut.
  5. rurkę z łaźni wodnej wyjmuje się i przemywa 3 do 4 razy dużą ilością soli fizjologicznej. Jest całkowicie zdekantowany po ostatnim praniu.
  6. natychmiast dodaje się i dobrze miesza dwie krople globuliny anty ludzkiej (AHG).
  7. odwirowuje się go z prędkością 1500 obr / min przez jedną minutę i bada pod kątem hemaglutynacji.
  8. w przypadku ujemnej hemaglutynacji dodaje się wstępnie uwrażliwione komórki odczynnika w celu zbadania reaktywności AHG. Aglutynację należy zaobserwować po dodaniu komórek kontrolnych Coombsa.

wynik interpretacji testu Coomba

wynik interpretacji testu Coomba

pozytywny: zlepianie się czerwonych krwinek (aglutynacja) podczas badania.

aglutynacja komórek krwi podczas bezpośredniego testu Coomba sugeruje, że przeciwciała mogą być obecne na czerwonych krwinkach pacjenta i że stan hemolizy może się utrzymywać.

aglutynacja komórek krwi podczas pośredniego testu Coomba sugeruje obecność przeciwciał krążących we krwi, które mogą powodować reakcję układu odpornościowego na wszelkie czerwone krwinki, które są uważane za obce dla organizmu-szczególnie te, które mogą być obecne podczas transfuzji krwi.

negatywny: brak zlepiania się lub aglutynacji krwinek czerwonych.

zastosowania testu Coomba

  1. test coomba jest jednym z badań krwi stosowanych w celu ustalenia rodzaju niedokrwistości, na którą cierpi pacjent z anemią.
  2. podaje się test pośredni w celu ustalenia, czy istniała potencjalna zła reakcja na transfuzję krwi.
  3. banki krwi używają pośredniego testu Coombsa do określenia, czy istnieje prawdopodobieństwo wystąpienia niepożądanego działania na krew, która ma zostać przetoczona.
  4. testy Coombsa są stosowane do wykrywania przeciwciał anty-Rh.
  5. jest również stosowany do wykrywania niekompletnych przeciwciał w brucelozie i innych chorobach.
  6. pośredni test Coombsa jest stosowany w badaniach prenatalnych kobiet w ciąży.
  7. badanie wykonuje się na próbce krwi noworodka, zwykle w przypadku noworodka z żółtaczką.
  8. pomaga w wykrywaniu stanów takich jak niedokrwistość hemolityczna, przewlekła białaczka limfocytowa, erytroblastoza fetalis, mononukleoza zakaźna, zakażenie mykoplazmatyczne, kiła, toczeń rumieniowaty układowy itp.

ograniczenia testu Coomba

  • czasami, zwłaszcza u osób starszych, test Coomba będzie miał nieprawidłowy wynik nawet bez innych chorób lub czynników ryzyka.
  • test może być rzadko używany do diagnozowania schorzenia.
  1. http://www.shareyouressays.com/knowledge/useful-notes-on-coombs-test/115418
  2. Coombs, R. R.; Mourant, A. E.; Race, R. R. (1945). “A new test for the detection of weak and incomplete Rh aglutynins”. British journal of experimental pathology. 26: 255–66.
  3. Immunologia (2 wyd.).Londyn: Wydawnictwo Naukowe BIOS.
  4. Parija S. C. Podręcznik Mikrobiologii & Immunologia.(2 wyd.). Indie: Elsevier India.
  5. Sastry A. S. & Podstawy mikrobiologii medycznej. New Delhi: Jaypee Brothers Medical Publishers.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.